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            單克隆抗體的制備過程你會嗎

            發布時間:2022-08-24   點擊次數:21次
              單克隆抗體是新一代抗體用于科研、診斷和治療,兔單抗技術通過用高質量兔單抗來替換多抗或低親合力鼠單抗產品,來改進難以復制的診斷產品。
             
              單克隆抗體的出現帶來了許多好處。首先,兔抗血清通常含有高親合力抗體,可以比鼠抗血清識別更多種類的表位。其次,單克隆抗體能夠以識別許多在小鼠中不產生免疫的抗原。
             
              單克隆抗體技術具體過程:
             
              1、免疫脾細胞的制備
             
              制備單克隆抗體的動物多采用純系Balb/c小鼠。免疫的方法取決于所用抗原的性質。免疫方法同一般血清的制備,也可采用脾內直接免疫法。
             
              2、骨髓瘤細胞的培養與篩選
             
              在融合前,骨髓瘤細胞應經過含8-AG的培養基篩選,防止細胞發生突變恢復HGPRT的活性(恢復HGPRT的活性的細胞不能在含8-AG的培養基中存活)。骨髓瘤細胞用10%小牛血清的培養液在細胞培養瓶中培養,融合前24h換液一次,使骨髓瘤細胞處于對數生。
             
              3、細胞融合的關鍵:
             
              1)、技術上的誤差常常導致融合的失敗。例如,供者淋巴細胞沒有查到免疫應答。這必然要失敗的。
             
              2)、融合試驗最大的失敗原因是污染,融合成功的關鍵是提供一個干凈的環境,以及適宜的無菌操作技術。
             
              4、陽性克隆的篩選應盡早進行
             
              通常在融合后10天作第一次檢測,過早容易出現假陽性。檢測方法應靈敏、準確、而且簡便快速。具體應用的方法應根據抗原的性質,以及所需單克隆抗體的功能進行選擇。常用的方法有RIA法、ELISA法和免疫熒光法等。其中ELISA法,RIA法最準確。陽性克隆的篩選應進行多次,均陽性時才確定為陽性克隆進行擴增。
             
              5、克隆化
             
              克隆化的目的是為了獲得單一細胞系的群體??寺』瘧M早進行并反復篩選。這是因為初期的雜交瘤細胞是不穩定的,有丟失染色體的傾向。反復克隆化后可獲得穩定的雜交瘤細胞株。

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